灵芝母种制作技术

一、准备用品与试剂

主要包括各种营养物质、高压灭菌锅、天平、棉塞、试管（20毫米×200毫米）、稀碱液（1摩尔／升ＮａＯＨ溶液，即4克氢氧化钠溶于100毫升水）、稀酸液（1摩尔／升盐酸溶液，即84毫升浓盐酸加水916毫升）等。

二、培养基配方

1、马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml。

2、马铃薯100g、麸皮100克、蔗糖20g、KH2PO4 1g，MgSO4 0.5g、琼脂20g、水1000ml。

3、马铃薯200g、蔗糖20g、KH2PO4 2g，MgSO4 0.5g、维生素B1 20毫克、琼脂20g、水1000ml。

三、培养基配制

1、马铃薯等块茎、植物根去皮后切块洗净，加水1000毫升，文火煮沸30分钟后过滤取汁，其他各种成分称量要准确，配制过程中葡萄糖要最后加入，灵芝一般要求PH5.5-6，用稀碱1摩尔/升Na〇H、稀酸1摩尔/升HC1来调整酸碱度至适度为止。将琼脂（若为条形需剪短）放入所配液体内，文火煮沸，煮时不断搅拌至溶解。

2、培养基煮好后趁热分装试管，装量为试管长度的四方之一左右，然后塞上棉塞。倾倒时要防止培养基沾污管口，一旦沾上应用纱布擦净。试管要事先洗净，严防油污。棉塞用未脱脂普通棉花，大小、松紧适中，要求与管壁紧贴。

四、灭菌与培养

棉塞端包扎塑料薄膜，放入灭菌锅，经高压灭菌后，除去包扎的薄膜，直立于容器或框架内，使管内水蒸气向外界散发，当温度下降至50℃左右时（取试管1支贴放脸上，很烫但能放得住，约为50℃左右），即可整捆斜放在斜面板上，斜面长度不超过管长的二分之一，冷却后即凝固成斜面培养基。