菌种怎么制作，菌种保藏方法

一、菌种怎么制作

1、一级菌种

（1）向烧杯内放入切成块的土豆，然后煮30多分钟，煮好后过滤溶液备用。

（2）向溶液内放入琼脂，再将其烧开，待琼脂完全溶化后继续煮一段时间。

（3）煮好后，将汁液分放至试管，再用高压锅消毒杀菌。消毒后将试管斜放，直到冷凉凝固后即可开始接种。

（4）用酒精对嫩蘑菇做杀菌处理，然后在无菌箱内切成小块，接种至琼脂基质上面。

（5）用塞子堵上试管口，再将琼脂基质放入培养箱内，待长满菌丝后即可形成一级菌种。

2、二级菌种

（1）将煮熟的大豆和谷粒置于无菌的条件下晾干，再装入经过高温杀菌的玻璃瓶内。

（2）将瓶子封口，放入高压锅中，经高压灭菌后放在无菌室冷凉。

（3）将培养瓶放至无菌箱内，再放入一级菌种，用的小匙挖出黄豆大小的菌种接种入玻璃瓶。

（4）接种后要封口，再将玻璃瓶放到培养室中，待长满菌丝后即可备用。

3、三级菌种

（1）制备方法与二级菌种基本一致，培养基可使用煮熟的麦粒、玉米粒及棉籽。

（2）三级菌种的菌丝长满后即可取出来培育，经历三级菌种的培育后可完全制成平菇菌。

二、菌种保藏方法

1、斜面低温保藏法

将菌种接种至适宜的固体斜面培养基上，待菌种充分生长后用油纸将棉塞部分包扎好，然后放入冰箱，温度控制在2-8℃即可。

2、甘油管保存法

（1）将80%甘油用高压蒸汽做灭菌处理，再将菌种放置在斜面培养基上培养，用无菌水制成高浓度的菌悬液。

（2）将1毫升甘油与菌液混匀，使甘油的浓度达到10-30%，然后放在-70℃的环境中冻存。

3、液体石蜡保藏法

（1）将液体石蜡装入三角烧瓶内，塞上棉塞，包扎好牛皮纸，然后放在0.1MPa、121.3℃的环境中灭菌半小时。

（2）灭菌后，将烧瓶转移至40℃的温箱内蒸发水汽。

（3）在斜面培养基内培养菌种，得到健壮菌体，再用灭菌吸管注入石蜡，注入量以高出斜面顶端1厘米为宜。

（4）将试管直立，最后放在低温或室温环境中保存即可。